TỔNG HỢP cDNA MÃ HÓA KHÁNG NGUYÊN TOXOCARA EXCRETORY-SECRETORY (TES) -30 BẰNG PHƯƠNG PHÁP HÓA HỌC

Tóm tắt

Bệnh giun đũa chó mèo không có các triệu chứng điển hình nên việc chẩn đoán lâm
sàng gặp rất nhiều khó khăn, chủ yếu dựa trên kỹ thuật ELISA phát hiện kháng thể IgG kháng
lại kháng nguyên chất tiết của Toxocara spp. (Toxocara Excretory-Secretory - TES). TES-30
là một trong những kháng nguyên chính, quan trọng và mang tính bảo tồn cao của giống
Toxocara, được tiết ra bởi ấu trùng giai đoạn hai khi di chuyển trong cơ thể vật chủ. Do việc
nuôi ấu trùng để thu nhận kháng nguyên TES này rất khó khăn nên chúng tôi đã tiến hành
tổng hợp nhân tạo gen mục tiêu mã hóa kháng nguyên TES-30. Đầu tiên, gen mục tiêu (mã
số: AB009305.2) được tối ưu trình tự mã bộ ba cho phù hợp biểu hiện trong tế bào vật chủ E.
coli, và 18 đoạn oligos ngắn được thiết kế và tổng hợp bằng phần mềm DNA works, gen mục
tiêu được tổng hợp nhân tạo bằng phương pháp PCR hai bước. Tiếp đó, trình tự gen đã tổng
hợp được đưa vào vector tách dòng pJET1.2/blunt để kiểm tra khả năng tổng hợp và giải
trình tự gen để để đánh giá kết quả biểu hiện. Kết quả giải trình tự cho thấy phương pháp này
cho phép tổng hợp được trình tự gen mục tiêu với độ chính xác là 3/7 dòng plasmid. Tổng
hợp thành công được trình tự gen mong muốn giúp chủ động được nguồn nguyên liệu và mở
ra triển vọng tổng hợp các gen tái tổ hợp khó trong tương lai